串联表达PRRSV M与GP5蛋白重组腺病毒的构建及其免疫特性研究

串联表达PRRSV M与GP5蛋白重组腺病毒的构建及其免疫特性研究

利用PCR扩增出猪繁殖与呼吸综合征病毒的M基因,按正确的读码框与GP5基因串联,成功构建穿梭载体pShuttle-CMV-M-GP5,经PCR、测序鉴定正确.Pme Ⅰ线性化后在BJ5183大肠杆菌内与腺病毒骨架载体pAdEasy-1同源重组,产生重组腺病毒DNA.重组腺病毒DNA经Pac Ⅰ线性化后用脂质体转染HEK-293A细胞,在细胞内包装成完整的腺病毒,通过IFA可以检测到M与GP5串联的重组腺病毒构建成功,可以正确地表达目的蛋白.将构建好的重组腺病毒免疫小鼠,结果表明可以诱导产生较强的体液免疫应答(ELISA抗体和中和抗体)和细胞免疫应答(淋巴细胞增殖和CTL反应).证明该重组腺病毒具有较好的免疫原性,为下一步猪体免疫试验奠定了基础.

作 者： 蒋文明 姜平 李玉峰 汤景元 王先炜 杜以军 JIANG Wen-Ming JIANG Ping LI Yu-Feng TANG Jing-Yuan WANG Xian-Wei DU Yi-Jun   作者单位： 南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室,南京,210095  刊 名： 生物工程学报  ISTIC PKU 英文刊名： CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY  年，卷(期)： 2006 22(4)  分类号： Q786  关键词： PRRSV   M   GP5   重组腺病毒   体液免疫   细胞免疫  

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