HCMV截短UL83基因真核表达重组体的构建、转染及其免疫效力研究

HCMV截短UL83基因真核表达重组体的构建、转染及其免疫效力研究

为了构建人巨细胞病毒(HCMV)截短UL83基因真核表达重组体,实现其在Hep-2细胞中的稳定表达,研究该截短UL83基因真核表达重组体免疫效力,采用基因重组的方法,将HCMV AD169株截短UL83基因定向克隆到带有绿色荧光蛋白(GFP)作为报告基因的真核表达载体pEGFP-C1上,构建真核重组表达质粒pEGFP-C1-UL83;脂质体转染至Hep-2细胞中,G418筛选获得稳定表达pp65细胞表达系.经基因测序显示,重组体中截短UL83基因完全正确,RT-PCR和Western blot检测证实其可在Hep-2细胞中稳定表达.用该重组体和其表达产物在HCMV先天性感染小鼠模型上进行免疫保护试验显示,母鼠血清可检测到特异性抗HCMV pp65抗体,效价为:1∶2.51～1∶50.79;子鼠脑组织内未分离出病毒,亦未检测出病毒pp65蛋白抗原表达.初步结果表明,pEGFP-C1-UL83具有较好的免疫原性,可作为DNA疫苗刺激机体产生有效抗体,并具有阻止病毒垂直传播的保护性作用.

作 者： 高荣保 李艳秋 王明丽 GAO Rong-bao LI Yan-qiu WANG Ming-li   作者单位： 安徽医科大学基础医学院微生物学教研室,合肥,230032  刊 名： 微生物学报  ISTIC PKU 英文刊名： ACTA MICROBIOLOGICA SINICA  年，卷(期)： 2006 46(3)  分类号： Q78  关键词： HCMV截短UL83基因   绿色荧光蛋白   转染   Hep-2细胞   DNA疫苗  

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