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人regucalcin cDNA高表达重组质粒的构建及其在原核细胞中的表达
目的原核表达获得大量人regucalcin(RGN)蛋白.方法用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术从人肾皮质近曲小管上皮细胞(HK-2)中扩增RGN全长cDNA,将扩增的产物连接于测序载体pMD18-T,测序鉴定准确后,进行酶切,将正确的RGN全长cDNA与原核表达载体pET42b(+)构建成重组质粒pET42b(+)-RGN.将pET42b(+)-RGN先转化入大肠杆菌DH5α,提取质粒经双酶切鉴定正确后,再转化入表达宿主大肠杆菌DE3菌株.对转化菌株进行诱导、破菌,进行十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)与免疫印迹分析,鉴定RGN融合蛋白质表达的正确性.RGN重组融合蛋白经Ni2+亲和层析纯化,达电泳纯.结果构建了重组质粒pET42b(+)-RGN并获得高效表达,RGN重组融合蛋白经异丙基硫化-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导后以包涵体形式存在,表达的蛋白质相对分子质量为34 000.结论人RGN蛋白在pET42b(+)原核表达载体可获得高效表达,为进一步了解RGN蛋白质的结构、功能及其抗体的制备等奠定了基础.
作 者： 徐洪 胡亮 倪培华 吴洁敏 赵涵芳 XU Hong HU Liang NI Peihua WU Jiemin ZHAO Hanfang 作者单位： 徐洪,胡亮,赵涵芳,XU Hong,HU Liang,ZHAO Hanfang(上海交通大学医学院生物化学与分子生物学教研室,上海,200025)倪培华,吴洁敏,NI Peihua,WU Jiemin(上海交通大学医学院检验系,上海,200025)
刊 名： 检验医学 ISTIC PKU 英文刊名： LABORATORY MEDICINE 年，卷(期)： 2006 21(4) 分类号： Q503 关键词： Regucalcin 克隆 原核表达【人regucalcin cDNA高表达重组质粒的构建及其在原核细胞中的表】相关文章：
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