维甲酸受体β基因RNAi表达质粒的构建及其对A549细胞增殖和分化的影响

维甲酸受体β基因RNAi表达质粒的构建及其对A549细胞增殖和分化的影响

目的:利用RNA干扰(RNAi)技术,构建针对维甲酸受体(RAR)β基因的小干扰RNA(siRNA)表达质粒,诱导RARβ基因沉默,并观察其对肺癌细胞A549株的细胞周期和增殖的影响.方法:依据设计siRNA的原则,针对人RARβ的mRNA序列,设计并合成编码siRNA的2条寡核苷酸序列,经退火成互补双链,再克隆到pSUPER-NEO-GFP真核表达载体中构建重组体pSUPER-RARβ,转染至A549细胞中,以空质粒和RARβ高表达质粒转染为对照,用Western印迹检测RARβ基因的表达,并采用MTT试验检测转染后细胞株的增殖和细胞分化情况.结果:表达人类RARβ基因的siRNA重组表达质粒构建成功;MTT试验结果表明,转染的A549-RARβ-si细胞增殖能力降低.结论:采用RNAi技术特异阻断RARβ基因表达,通过转染A549细胞,可使其细胞形态发生变化,并抑制其细胞生长.

作 者： 林婵 王力 边六交 LIN Chan WANG Li BIAN Liu-Jiao   作者单位： 林婵,边六交,LIN Chan,BIAN Liu-Jiao(西北大学,基因工程中心,陕西,西安,710069)

王力,WANG Li(中国科学院,上海生命科学院研发中心,上海,200233) 

刊 名： 生物技术通讯  ISTIC 英文刊名： LETTERS IN BIOTECHNOLOGY  年，卷(期)： 2008 19(3)  分类号： Q78 Q25  关键词： 维甲酸受体β   RNA干扰   A549细胞   基因表达抑制  

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