家蝇防御素defensin cDNA的克隆及在毕赤酵母中的表达

家蝇防御素defensin cDNA的克隆及在毕赤酵母中的表达

提取家蝇总RNA,RT-PCR扩增编码家蝇防御素defensin的cDNA,克隆并测定了其序列,将该cDNA序列与酵母表达载体pPICZαA重组,构建酵母分泌型表达载体pPICZα-de,电激法转化毕赤酵母(Pichia pastoris)受体菌GS115.经表型筛选和PCR鉴定证明目的片段已稳定整合到酵母染色体基因组中.在含不同浓度的Zeocin平板上筛选到高拷贝整合的转化子,阳性克隆经甲醇诱导表达,用Tricine-SDS-PAGE确定了表达产物的正确性,琼脂孔穴平板扩散法、比浊法测定了表达产物的活性,对金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus具有一定的杀菌活性.

作 者： 金丰良 许小霞 赵士炜 古德祥 张文庆 JIN Feng-liang XU Xiao-xia ZHAO Shi-wei GU De-xiang ZHANG Wen-qing   作者单位： 中山大学有害生物控制与资源利用国家重点实验室,广东,广州,510275  刊 名： 中山大学学报（自然科学版）  ISTIC PKU 英文刊名： ACTA SCIENTIARUM NATURALIUM UNIVERSITATIS SUNYATSENI  年，卷(期)： 2006 45(3)  分类号： Q78  关键词： 家蝇   防御素   毕赤酵母   诱导表达   活性测定  

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