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乙酰肝素酶大亚基在毕赤酵母中的表达
目的 构建乙酰肝素酶(HPA)大亚基片段真核表达质粒,并在毕赤酵母中表达重组蛋白.方法 根据GenBank中登录的HPA大亚基基因序列设计引物,PCR方法扩增肝素酶基因,构建毕赤酵母真核表达质粒pPICZαA-HPA.电击穿孔法转化感受态毕赤酵母SDM1168,斑点免疫印迹法筛选重组菌株,PCR法鉴定阳性克隆.甲醇诱导表达重组蛋白,Western blot鉴定表达产物.结果 构建的重组真核表达质粒经双酶切及测序鉴定证明构建正确;斑点免疫印迹法筛选出的9个单菌落经PCR扩增,均可见1 161 bp的目的基因条带;表达产物经Western blot分析,具有良好的反应原性,表达量约为μg/L.结论 已成功构建了HPA大亚基片段真核表达质粒pPICZαA-HPA,并在毕赤酵母SDM1168中分泌表达了HPA大亚基.
作 者： 季颖 邱伟成 高新 付洁 王清清 宋海峰 作者单位： 季颖,高新,付洁,王清清,宋海峰(军事医学科学院放射与辐射医学研究所,北京,100850)邱伟成(军事医学科学院放射与辐射医学研究所,北京,100850;首都师范大学生命科学学院,北京,100048)
刊 名： 中国生物制品学杂志 ISTIC 英文刊名： CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS 年，卷(期)： 2010 23(3) 分类号： Q786 关键词： 乙酰肝素酶 大亚基 毕赤酵母 表达 Heparanase (HPA) C-terminal subunit Pichia pastoris Expression【乙酰肝素酶大亚基在毕赤酵母中的表达】相关文章：
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