正交优化法建立沙打旺ISSR-PCR最佳反应体系

正交优化法建立沙打旺ISSR-PCR最佳反应体系

根据正交试验设计的原理,设计了探索性正交试验和细调性正交试验来确定沙打旺ISSR-PCR体系中各成分的浓度.得到既稳定又能扩出最多条带的适合沙打旺的ISSR-PCR最佳反应体系,即20 μl的反应体系中含有1×buffer,dNTP 0.2 mmol/L,Taq酶1.0 U,引物0.3 μmol/L,Mg2+2.5 mmol/L,DNA模板2.5 ng/μl.然后对沙打旺ISSR-PCR最佳反应体系进行梯度退火试验,得到这条引物的最佳退火温度为54.1 ℃.这一最佳体系的建立为今后利用ISSR标记技术,研究沙打旺的遗传多样性提供了标准化程序.

作 者： 陈志宏 黄琳凯 张新全 王志刚   作者单位： 陈志宏,王志刚(全国畜牧兽医总站畜禽牧草种质资源保存利用中心,北京,100094)

黄琳凯,张新全(四川农业大学动物科技学院草业科学系,四川雅安,625014) 

刊 名： 安徽农业科学  ISTIC PKU 英文刊名： JOURNAL OF ANHUI AGRICULTURAL SCIENCES  年，卷(期)： 2006 34(13)  分类号： Q946-33  关键词： 沙打旺   ISSR   正交优化   反应体系  

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