噬菌体改组库的构建及高活性水蛭素变异体的筛选

噬菌体改组库的构建及高活性水蛭素变异体的筛选

目的: 运用DNA家族改组方法提高水蛭素的抗凝血酶活性.方法: 将水蛭素HV1、 HV2、 HV3基因等量混合, 用DNase I消化, 回收50 bp左右的片段, 再经无引物和有引物PCR扩增获得与原基因大小相同的改组分子, 构建噬菌体展示的水蛭素改组文库, 经凝血酶亲和淘选, ELISA筛选高活性的水蛭素变异体.结果: 经过DNA改组和噬菌体亲和筛选, 成功获得抗凝血酶活性提高的水蛭素变异体HV2-N47K.结论: 用DNA家族改组及亲和淘选技术能够筛选出高活性的水蛭素变异体蛋白, 这为其他分子的改组提供了借鉴.

作 者： 龙铟 刘家云 刘莉 王宗仁 LONG Yin LIU Jia-yun LIU Li WANG Zong-ren   作者单位： 龙铟,王宗仁,LONG Yin,WANG Zong-ren(第四军医大学西京医院中医科,陕西,西安,710032)

刘家云,LIU Jia-yun(第四军医大学西京医院检验科,陕西,西安,710032)

刘莉,LIU Li(第四军医大学药学系药理学教研室,陕西,西安,710032) 

刊 名： 细胞与分子免疫学杂志  ISTIC PKU 英文刊名： CHINESE JOURNAL OF CELLULAR AND MOLECULAR IMMUNOLOGY  年，卷(期)： 2006 22(2)  分类号： Q81  关键词： 水蛭素   DNA改组   亲和淘选  

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