化学与酶促相结合合成并克隆核糖体失活蛋白Gelonin基因

化学与酶促相结合合成并克隆核糖体失活蛋白Gelonin基因

利用已知Gelonin的氨基酸序列,逆向推算出整个基因的碱基序列,根据E.coli的密码子偏爱性和后续基因克隆的需要,通过沉默突变设计相应的酶切位点和碱基序列,将整个基因分为四段,每个片段约175～220 bp,每一个片段中的互补链从5′末端用化学合成100～120的碱基单链,其中两个链的3′末端有20个互补碱基.利用T4DNA 聚合酶酶促添补成双链DNA,用分子克隆技术,分别构建重组子,然后再构建成含整个Gelonin基因的表达载体pET-gel进行表达,经诱导后,获得了一个28 000的重组蛋白,并主要以可溶形式存在.

作 者： 李卓玉 石亚伟 袁静明 Wise J.G Trommer W.E   作者单位： 李卓玉,石亚伟,袁静明(山西大学生物工程中心,太原,030006)

Wise J.G,Trommer W.E(Kaiserslautern 大学化学系,Kaiserslautern 67653,德国) 

刊 名： 高等学校化学学报  ISTIC SCI PKU 英文刊名： CHEMICAL JOURNAL OF CHINESE UNIVERSITIES  年，卷(期)： 2002 23(3)  分类号： O516  关键词： 核糖体失活蛋白   Gelonin   基因化学合成   重组子   表达  

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