融合牛肠激酶轻链EKL包涵体蛋白的复性纯化

融合牛肠激酶轻链EKL包涵体蛋白的复性纯化

大肠杆菌高密度发酵表达肠激酶轻链融合蛋白DsbA-rEKL,主要以包涵体形式存在.包涵体经4mol/L尿素和0.5% Triton X-100洗涤,以6mol/L盐酸胍、100mmol/LDTT溶解,在胱氨酸存在下,以脉冲加样方式复性.融合蛋白复性在6mmol/L胱氨酸存在下、脉冲加量0.03mg/mL和复性终蛋白浓度0.3mg/mL为最佳复性方案.复性的融合蛋白加2mmol/L CaCL2后快速自切.经IDA-Sepharose及Q-Sepharose纯化,rEKL纯度可达95%以上,可高效酶切重组瑞特普酶融合蛋白Trx-rPA.实现了大规模生产rEKL,每升发酵液经复性及纯化后,可得rEKL60mg/L以上,使以融合蛋白表达rPA等药用蛋白成为现实.

作 者： 易进华 张元兴 YI Jin-Hua ZHANG Yuan-Xing   作者单位： 易进华,YI Jin-Hua(华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室,上海,200237;上海复旦张江生物医药股份有限公司,上海,201203)

张元兴,ZHANG Yuan-Xing(华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室,上海,200237) 

刊 名： 生物工程学报  ISTIC PKU 英文刊名： CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY  年，卷(期)： 2006 22(5)  分类号： Q78  关键词： 融合蛋白   肠激酶   复性   包涵体  

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