- 相关推荐
海蓬子盐胁迫初期抑制消减杂交cDNA文库的构建
为提高缩叶肉质盐生植物海蓬子总RNA和mRNA的质量,将改良CTAB法与Tripure 试剂盒方法相结合, 从 300 mg海蓬子发芽后20 d的幼苗中成功分离和纯化了高纯度的总RNA和mRNA.并以无NaCl处理为Driver,以 200 mmol/L NaCl处理 24 h、48 h、72 h的幼苗为Tester,通过cDNA双链的合成及两次PCR扩增,富集到两组处理中差异表达的大小在200～1 300 的cDNA序列,pGEM-T的连接和蓝白斑筛选表明杂交文库滴度和重组率分别达到2.6×107和96%,共收集阳性克隆12 000个, 形成了抑制消减杂交的质粒cDNA文库.随机挑取酶切质粒的电泳分析表明,载体中均有插入片段.两种RNA提取方法的结合有效提高了多汁多色素海蓬子RNA的质量,高效抑制消减杂交文库的建立为进一步分析基因的差异表达及分离抗盐基因奠定了基础.
作 者： 张大栋 马鸿翔 吉晓佳 周春霖 王茂文 汤日圣 杨永华 ZHANGDa-dong MA Hong-xiang JI Xiao-jia ZHOU Chun-lin WANG Mao-wen TANG Ri-sheng YANG Yong-hua 作者单位： 张大栋,ZHANGDa-dong(江苏省农业科学院农业遗传生理研究所暨江苏省农业生物学重点实验室,江苏,南京,210014;南京大学医药生物技术国家重点实验室,江苏,南京,210093)马鸿翔,汤日圣,MA Hong-xiang,TANG Ri-sheng(江苏省农业科学院农业遗传生理研究所暨江苏省农业生物学重点实验室,江苏,南京,210014)
吉晓佳,杨永华,JI Xiao-jia,YANG Yong-hua(南京大学医药生物技术国家重点实验室,江苏,南京,210093)
周春霖,王茂文,ZHOU Chun-lin,WANG Mao-wen(江苏沿海地区农业科学研究所,江苏,盐城,224002)
刊 名： 江苏农业学报 ISTIC PKU 英文刊名： JIANGSU JOURNAL OF AGRICULTURAL SCIENCES 年，卷(期)： 2006 22(2) 分类号： Q785 关键词： 盐生植物海蓬子 抑制消减抑制杂交 cDNA文库 RNA分离【海蓬子盐胁迫初期抑制消减杂交cDNA文库的构建】相关文章：
海南坡鹿外周血白细胞cDNA文库的构建04-26
抑制性消减杂交技术在对虾基因克隆中的应用04-26
利用改进的Oligo-capping法构建手掌参全长cDNA文库04-26
芜菁消减文库特异基因片段功能的初步分析04-26
人舌鳞癌(Tca-8113)细胞cDNA表达文库的建立04-26
盐胁迫对4个玉米品种的萌发及生长的影响04-27
盐胁迫下植物的细胞信号转导04-27