人载脂蛋白A-Ⅰ的原核表达及二级结构和功能鉴定

人载脂蛋白A-Ⅰ的原核表达及二级结构和功能鉴定

目的为获得高产量并具有正常结构和生物学活性的原核表达人载脂蛋白A-Ⅰ(apoA-Ⅰ).方法利用DNA重组技术对人apoA-Ⅰ的前8个氨基酸引入沉默突变,以pET-30b(+)为原核表达载体,在apoA-Ⅰ多肽链C-末端引入6×组氨酸标签,采用镍亲和层析对表达蛋白进行纯化.分别使用圆二色分析、浊度澄清试验和胆固醇外流试验对重组apoA-Ⅰ的α螺旋含量、脂质结合动力学及促细胞胆固醇外流能力进行评价.结果获得高表达产量的重组apoA-Ⅰ(12 mg纯化apoA-Ⅰ蛋白/L菌液);重组蛋白的α螺旋含量为(54±4)%,脂质结合动力学速率常数k1/2为0.059±0.002 min-1,胆固醇外流百分比为(16.68±1.77)%.结论可获得高产量并具有生物学活性的重组人apoA-Ⅰ;为构建apoA-Ⅰ其他突变体提供模式.

作 者： 祝学卫 吴钢 曾武威 薛红 陈保生 ZHU Xue-wei WU Gang ZENG Wu-wei XUE Hong CHEN Bao-sheng   作者单位： 中国医学科学院,中国协和医科大学,基础医学研究所,医学分子生物学国家重点实验室,北京,100005  刊 名： 基础医学与临床  ISTIC PKU 英文刊名： BASIC & CLINICAL MEDICINE  年，卷(期)： 2006 26(4)  分类号： Q816  关键词： 人载脂蛋白A-Ⅰ   原核表达   α螺旋含量   脂质结合   细胞胆固醇外流  

【人载脂蛋白A-Ⅰ的原核表达及二级结构和功能鉴定】相关文章：

人源胸腺素α原和白介素2融合蛋白的基因克隆与原核表达04-27

人IP-10蛋白原核表达及其活性鉴定04-26

新城疫病毒F和HN蛋白的原核表达04-27

STAT6分子不同功能域原核表达载体的构建04-26

Stxl-A亚单位的原核表达、复性及抗原性鉴定04-26

重组猪源戊型肝炎病毒衣壳蛋白的原核表达及鉴定04-26

大肠癌相关基因PGDH原核表达质粒的构建及表达04-26

人基质蛋白酶2(MMP-2)类血红素结构域原核表达优化04-26

GST-talin1融合蛋白的原核表达及纯化04-27

运用于原核生物表达谱的研究技术04-27