Caspase-3反义寡核苷酸对γ-射线诱导的HL-60细胞中caspa

Caspase-3反义寡核苷酸对γ-射线诱导的HL-60细胞中caspase-3表达与细胞凋亡的抑制作用

γ-射线可诱导人髓性白血病细胞株HL-60细胞凋亡,但其机制尚未完全明了.为了观察caspase-3在这种细胞凋亡模型中的作用,本研究设计合成针对caspase-3 mRNA 5'-非编码区和编码起始区的反义寡核苷酸(ASODNs),即ASODN-1和ASODN-2,以脂质体介导法将不同浓度ASODN-1和ASODN-2转染进入HL-60细胞,γ-射线照射.应用TUNEL法观察凋亡细胞形态学变化及检测凋亡细胞百分率,免疫细胞化学、Western blotting和RT-PCR技术分别检测caspase-3及其mRNA在引入ASODNs前后的表达水平,并以错配寡核苷酸(MODN)转染及未转染细胞作为对照组.TUNEL法检测发现,当ASODN-1和ASODN-2转染终浓度≥3μmol/L时,γ-射线诱导的HL-60细胞凋亡率降低,与对照组相比均有显著性差异(P＜0.01).免疫细胞化学结果显示,与两对照组相比,转染ASODNs后各组caspase-3阳性细胞率显著下降,阳性细胞染色减弱,其平均灰度值显著增高(P＜0.01).Western blotting检测显示,转染ASODNs组细胞caspase-3蛋白酶原表达降低,其中ASODN-1组显著低于ASODN-2组.RT-PCR结果显示两对照组细胞caspase-3 mRNA均有明显表达,转染ASODNs后caspase-3 mRNA表达丰度降低.另外,ASODN-1抑制细胞凋亡和caspase-3表达的作用显著强于ASODN-2(分别为P＜0.05和P＜0.01).实验结果表明,caspase-3 mRNA ASODNs能够抑制γ-射线照射诱导的HL-60细胞凋亡,下调caspase-3蛋白和caspase-3 mRNA的表达水平,其抑制作用在一定范围内呈剂量依赖性.

作 者： 张晓田 宋天保 李冬民 吴晓琳 ZHANG Xiao Tian SONG Tian Bao LI Dong Min WU Xiao Lin   作者单位： 张晓田,宋天保,ZHANG Xiao Tian,SONG Tian Bao(西安交通大学医学院环境与疾病相关基因教育部重点实验室)

李冬民,吴晓琳,LI Dong Min,WU Xiao Lin(西安交通大学医学院人体解剖学与组织胚胎学系,西安,710061) 

刊 名： 分子细胞生物学报  ISTIC PKU 英文刊名： JOURNAL OF MOLECULAR CELL BIOLOGY  年，卷(期)： 2006 39(4)  分类号： Q2  关键词： Caspase-3   反义寡核苷酸   HL-60细胞   细胞凋亡   γ-射线辐照  

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