Taqman荧光定量PCR是核酸水平对管家基因GAPDH进行定量的好方法

Taqman荧光定量PCR是核酸水平对管家基因GAPDH进行定量的好方法

目的比较Taqman荧光定量PCR法、SYBR Green I荧光定量PCR法和普通PCR法制作3-磷酸甘油醛(GAPDH)标准曲线的检出下限、线性范围的差异,确定一种较好的GAPDH绝对定量方法.方法构建含GAPDH全长的质粒,经PCR和EcoR I限制性酶切鉴定确认后,紫外定量并连续稀释10倍作为标准品.分别用Taqman法和SYBR Green I法于荧光定量PCR仪上制作标准曲线,同时用普通PCR结合琼脂糖凝胶电泳利用Quantity One软件定量并制作标准曲线.结果Taqman法检出GAPDH的下限为2.0×104拷贝,线性范围:2.0×104～2.0×1010拷贝;SYBR Green I法检出GAPDH的下限为2.0×107拷贝,线性范围:2.0×107～2.0×1010拷贝;普通PCR检出GAPDH的下限为2.0×106拷贝,线性范围:2.0×107～2.0×109拷贝.结论Taqman荧光定量PCR法比SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR法和普通PCR法的灵敏度高,线性范围宽,是核酸水平对GAPDH定量的好方法.

作 者： 王萍 丛敏 李忆梅 唐淑珍 刘晓明 王宝恩 贾继东 尤红 Wang Ping Cong Min Li Yimei Tang Shuzhen Liu Xiaoming Wang Baoen Jia Jidong You Hong   作者单位： 首都医科大学附属北京友谊医院肝病研究中心  刊 名： 首都医科大学学报  ISTIC PKU 英文刊名： JOURNAL OF CAPITAL UNIVERSITY OF MEDICAL SCIENCES  年，卷(期)： 2006 27(2)  分类号： Q503  关键词： PCR   GAPDH   荧光定量  

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