以Trx为骨架构建可诱导表达的酵母构象型随机肽库

以Trx为骨架构建可诱导表达的酵母构象型随机肽库

目的:以硫氧还蛋白(Trx)为骨架,pBridge为载体,构建可诱导表达的酵母构象型随机10肽库.方法:利用PCR扩增出trx基因,向trx的突环区引入AscⅠ酶切位点,构建pBridge-mTrx重组载体.采用(NNK)10的编码方式设计并合成两条寡核苷酸链,经退火、延伸,AscⅠ,RsrⅡ双酶切后,克隆至pBridge-mTrx载体,电转化E.coli DH10B感受态细胞.对所构建多肽文库的库容和随机性进行了鉴定,并利用Western印迹对文库的可诱导性进行分析.结果:获得库容量为8.7×108的随机肽库.随机挑选20个克隆进行测序,4个核苷酸的出现频率与理论值接近.在Met缺陷培养基中,随机肽库可被诱导表达.结论:成功构建可诱导表达的随机肽库,为进一步筛选特异性多肽奠定了基础.

作 者： 杜建芳 王金凤 孙万军 蔡欣 王颖 邹民吉 王嘉玺 徐东刚 DU Jian-Fang WANG Jin-Feng SUN Wan-Jun CAI Xin WANG Ying ZOU Min-Ji WANG Jia-Xi XU Dong-Gang   作者单位： 杜建芳,王金凤,蔡欣,王颖,邹民吉,王嘉玺,徐东刚,DU Jian-Fang,WANG Jin-Feng,CAI Xin,WANG Ying,ZOU Min-Ji,WANG Jia-Xi,XU Dong-Gang(军事医学科学院基础医学研究所,北京,100850)

孙万军,SUN Wan-Jun(军事医学科学院附属医院,北京,100071) 

刊 名： 军事医学科学院院刊  ISTIC PKU 英文刊名： BULLETIN OF THE ACADEMY OF MILITARY MEDICAL SCIENCES  年，卷(期)： 2006 30(3)  分类号： Q516  关键词： 硫氧还蛋白   pBridge   可诱导   酵母构象型随机10肽库  

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