内毒素结合肽的改良、原核表达及纯化

内毒素结合肽的改良、原核表达及纯化

目的:对人内毒素结合肽(endotoxin binding peptide,EBP)进行改良,获得突变体mEBP(mutate of endotoxin binding peptide,mEBP)基因并进行原核表达,纯化获得高纯度的mEBP.方法:应用PCR定点诱变方法获得mEBP基因,构建PinpointXa-3/mEBP融合表达载体,在BL21(DE3)pLysS宿主菌进行表达,溶菌酶裂解法提取包涵体,融合蛋白经PinpointTMXa纯化后,由factorXa酶切,获得目的肽,RP-HPLC纯化获得高纯度的mEBP.结果:应用PCR定点诱变技术完成了EBP第5,18位谷氨酰胺→赖氨酸的定点突变,且通过原核表达,色谱纯化获得了高纯度的mEBP.结论:成功获得高纯度的mEBP,为下一步的抗内毒素功能检测奠定基础.

作 者： 孙亚丽 刘友生 杨海捷 SUN Ya-li LIU You-sheng YANG Hai-jie   作者单位： 第三军医大学西南医院病理研究所,重庆,400038  刊 名： 中国生物工程杂志  ISTIC PKU 英文刊名： CHINA BIOTECHNOLOGY  年，卷(期)： 2006 26(3)  分类号： Q81  关键词： 内毒素结合肽   突变   表达   纯化  

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