粪便中肠球菌SYBR GreenI荧光定量PCR检测方法的建立

粪便中肠球菌SYBR GreenI荧光定量PCR检测方法的建立

目的 利用SYBR GreenI荧光定量PCR方法,建立肠球菌实时荧光PCR检测方法,并初步应用于粪便中肠球菌的检测.方法 根据GenBank发表的肠球菌23S rRNA基因序列的保守区域设计合成特异性的引物;利用构建的质粒标准品绘制两种标准曲线,构建基因拷贝数、细菌数为分析指标的定量分析模型并初步应用于粪便标本的检测分析.结果 所建立的SYBR GreenI荧光定量PCR方法检测灵敏度可达7个拷贝数/reaction.粪便样本根据实时荧光定量PCR方法所得的理论数值与培养菌值之间差异无显著性(P＞0.05).非炎性腹泻标本中菌数与健康成人标本中菌数差异无显著性(P＞0.05).灵敏度曲线所得的数值大于菌数标准曲线,可能由于DNA提取过程中存在部分的损失.检测粪便标本结果显示SYBR GreenI荧光定量PCR方法较平板计数法敏感、快捷、简便.结论 本研究建立了一种灵敏、特异、简便易行的肠球菌定量检测方法.

作 者： 任月 袁杰利 卢行安 曹涤菲 蔡竹 REN Yue YUAN Jie-li LU Xing-an CAO Di-fei CAI Zu   作者单位： 任月,REN Yue(大连医科大学,辽宁,大连,116027)

袁杰利,YUAN Jie-li(大连医科大学,微生态学教研室,辽宁,大连,116027)

卢行安,LU Xing-an(辽宁出入境检验检疫局,辽宁,大连,116001)

曹涤菲,CAO Di-fei(黑龙江八一农垦大学,黑龙江,大庆,163319)

蔡竹,CAI Zu(大连医科大学,组织人事部,辽宁,大连,116027) 

刊 名： 中国微生态学杂志  ISTIC 英文刊名： CHINESE JOURNAL OF MICROECOLOGY  年，卷(期)： 2007 19(6)  分类号： Q378.992  关键词： 肠球菌   荧光定量PCR   粪便  

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