牛疱疹病毒Ⅰ型ul49(VP22)基因的序列分析及其表达

牛疱疹病毒Ⅰ型ul49(VP22)基因的序列分析及其表达

以牛疤疹病毒Ⅰ型(BHV-Ⅰ)国内地方分离株感染的细胞培养物制备PCR模板,扩增出大小约0.77kb的u149基因完整编码区片段,将扩增片段克隆到pMD18-T载体中,获得含u149基因的重组质粒pMD-VP22.采用双脱氧末端终止法进行序列测定,发现与国外Cooper株u14g基因序列完全一致,说明u149基因相当保守.进一步将BHV-Ⅰu149完整编码区片段插入原核表达载体pET-28a和真核表达载体pEGFP-C1中,获得分别与6xHis融合的原核表达质粒pET-28aVP22和与EGFP融合的真核表达质粒pEGFPVP22.将pET-28aVP22转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,SDS-PAGE电泳检测发现在38kDa处有一条特异性的表达带.利用脂质体介导,将pEGFPVP22转染PK-15细胞,经G418加压筛选,获得稳定表达VP22的细胞克隆.在倒置荧光显微镜直接检测未固定的活细胞,发现pEGFPVP22转染细胞能发出很强的荧光并主要集中在细胞核中,而对照载体pEGFP-C1转染细胞的荧光分布于胞浆.

作 者： 余晓岚 肖少波 方六荣 金梅林 陈焕春   作者单位： 华中农业大学畜牧兽医学院,湖北,430070 刊 名： 畜牧市场 英文刊名： STOCKBREEDING MARKET 年，卷(期)： 2009 ""(10) 分类号： S8 关键词： 牛疱疹病毒Ⅰ型   ul49基因   克隆   序列分析   表达  

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