胆固醇氧化酶法测定血清总胆固醇
胆固醇氧化酶法测定血清总胆固醇
【原理】
血清中总胆固醇(total cholesterol,TC)包括游离胆固醇(free cholesterol,FC)和胆固醇酯(cholesterol ester,CE)两部分。血清中胆固醇酯可被胆固醇酯酶水解为游离胆固醇和游离脂肪酸(FFA),胆固醇在胆固醇氧化酶的'氧化作用下生成△4-胆甾烯酮和过氧化氢,H2O2在4-氨基安替比林和酚存在时,经过氧化物酶催化,反应生成苯醌亚胺非那腙的红色醌类化合物,其颜色深浅与标本中TC含量成正比。 【试剂】
1.胆固醇液体酶试剂组成(具体含量见相关文献)
GOOD's缓冲液(pH6.7) 胆固醇酯酶 胆固醇氧化酶 过氧化物酶 4-AAP 苯酚
50mmol/L ≥200U/L ≥100U/L ≥3 000U/L 0.3mmol/L 5mmol/L
2.胆固醇标准溶液5.17 mmol/L (200 mg/dl) 精确称取胆固醇200 mg,用异丙醇配成100 ml溶液,分装后,4℃保存,临用取出。也可用定值的参考血清作标准。 【操作步骤】 终点法检测TC按下表依次加样。
酶法测定TC操作步骤
项目 血清(μl) 标准液/定值血清(μl)
蒸馏水(μl) 酶试剂(μl)
测定管 50 - - 1.50
标准管 - 50 - 1.50
空白管 - - 50 1.50
混匀后,37℃保温5 min,用分光光度计比色,于500 nm波长处以空白管调零,读出各管吸光度。 【计算】
血清TC (mmol/L)=
测定管吸光度
×胆固醇标准液浓度
标准管吸光度
【参考范围】 血清参考值:3.0~5.20 mmol/L;危险阈值:5.20~6.20 mmol/L;高胆固醇血症:≥6.20 mmol/L。 【临床意义】
1.TC增高
常见于动脉粥样硬化、原发性高脂血症(如家族性高胆固醇血症、家
族性ApoB缺陷症、多源性高胆固醇血症、混合性高脂蛋白血症等)、糖尿病、肾病综合征、总胆管阻塞、甲状腺功能减退、肥大性骨关节炎、老年性白内障和牛皮癣。
2.TC降低
常见于低脂蛋白血症、贫血、败血症、甲状腺功能亢进、肝脏疾病、
严重感染、营养不良、肠道吸收不良和药物治疗过程中的溶血性黄疸及慢性消耗性疾病,如癌症晚期等。
胆固醇氧化酶法测定血清总胆固醇 【注意事项】1.试剂中酶的质量影响测定结果。
2.若需检测游离胆固醇浓度,将酶试剂成分中去掉胆固醇酯酶即可。 3.检测标本可为血清或者血浆(以肝素或EDTAK2抗凝)。 【评价】 本方法线性范围为≤19.38 mmol/L (750 mg/d1)。
本方法特异性好和灵敏度高,既可用于手工操作,也可自动化分析;既可作终点法检测,也可作速率法检测。
在终点法中血红蛋白高于2 g/L时引起正干扰;胆红素高于0.1 g/L时有明显负干扰;血中维生素C与甲基多巴浓度高于治疗水平时,会使结果降低。但是在速率法中上述干扰物质影响较小。高TG血症对本法无明显影响。
检测TC的血清(浆)标本密闭保存时,在4℃可稳定1周,-20℃可稳定半年以上。
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