核-胞浆蛋白提取方法

时间:2021-11-05 19:37:08 资料 我要投稿

核-胞浆蛋白提取方法

核蛋白/胞浆蛋白提取试剂盒

产品组成:

产品组成 规格 提取液A 提取液B 蛋白酶抑制剂混合物

说明书

BB-3112-1

50T 10ml 10ml 250ul 1

BB-3112-2 100T 20ml 20ml 500ul 1

储存条件:

蛋白提取液2-8℃保存;蛋白酶抑制剂-20℃保存。

有效期:

一年。

产品简介:

贝博核蛋白和胞浆蛋白提取试剂盒提供配套试剂,适用于从各种原代或传代细胞和各种实体组织,如脑、脊髓、神经结或纤维、脂肪、肝脏、消化道、肾脏、心脏、肌肉、血管、结缔组织等哺乳动物组织中提取核蛋白和胞浆蛋白。提取过程简单方便,可在1小时内完成。制备的核蛋白和胞浆蛋白不仅纯度高,保持天然活性,而且绝少交叉污染。提取的蛋白可用于Western Blotting、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、免疫共沉淀、酶活性测定等蛋白研究。

应用示例:

1 2 3

图片说明:用核蛋白提取试剂盒提取大肠组织样本的SDA-PAGE的电泳考染照片和Western照片。图1泳道中1、2、3分别为Marker、胞浆蛋白、核蛋白样本。图2为以上样品的GAPDH内参的WB结果照片。

使用方法:

细胞蛋白提取

1. 提取液制备:每200ul冷的蛋白提取液A和B中分别各加入2ul蛋白酶抑制剂

混合物,混匀后置冰上备用。

2. 取5-10×106个细胞,在4℃,500×g条件下离心2-3分钟,小心吸取培养基,

尽可能吸干,收集细胞。

3. 用冷PBS洗涤细胞两次,每次洗涤后尽可能吸干上清。

4. 每5-10×106中加入200μl冷的提取液 A,高速涡旋振荡15秒或吹打混匀,置

冰上15分钟,中间每隔5分钟涡旋振荡或吹打混匀。

5. 再次高速涡旋振荡5秒,然后在4℃,16000×g条件下离心5分钟。

6. 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管,即可得到胞浆蛋白,请置于冰上或-80

℃冰箱保存备用。

7. 沉淀用PBS洗涤一次,然后在4℃,16000×g条件下离心5分钟,弃上清。

8. 在沉淀中加入200μl冷的提取液B,高速涡旋振荡15秒。 9. 置冰上40分钟,每隔10分钟高速涡旋振荡15秒。 10. 在4℃,16000×g条件下离心10分钟。

11. 快速将上清吸入另一预冷的'干净离心管,即可得到核蛋白。

③④

12. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。

组织蛋白提取

1. 提取液制备:每200ul冷的蛋白提取液A和B中分别各加入2ul蛋白酶抑制剂

混合物,混匀后置冰上备用。

2. 取适量组织样本剪碎,加冷PBS,用组织匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体(或

用液氮研磨),冰上静置5分钟,小心将上清吸入另一预冷的干净离心管。 3. 在4℃,500×g条件下离心2-3分钟,弃上清。

4. 每20ul细胞压积中加入200μl冷的提取液 A,高速涡旋振荡15秒或吹打混匀,

置冰上15分钟,中间每隔5分钟涡旋振荡或吹打混匀。

5. 再次高速涡旋振荡5秒,然后在4℃,16000×g条件下离心5分钟。

6. 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管,即可得到胞浆蛋白,请置于冰上或-80

℃冰箱保存备用。

7. 沉淀用PBS洗涤一次,然后在4℃,16000×g条件下离心5分钟,弃上清。 8. 在沉淀中加入200μl冷的提取液B,高速涡旋振荡15秒。 9. 置冰上40分钟,每隔10分钟高速涡旋振荡15秒。 10. 在4℃,16000×g条件下离心10分钟。

11. 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管,即可得到核蛋白。

②③

12. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。

参考文献:

● Guang Yu, Tonghai Yan, Ye Feng et al. Ser9 phosphorylation causes cytoplasmic detention of I2PP2A/SET in Alzheimer disease

Neurobiology of Aging 2013 (IF=6.189)

● Xiaohui Yan,Tianjiao Lyu,Nan Jia et al. Huaier Aqueous Extract Inhibits Ovarian Cancer Cell Motility via the AKT/GSK3β/β-Catenin Pathway PLoS ONE 2013 (IF=4.092)

● Jinchun Qian, Fengrong Jiang, Bin Wang et al. Ophiopogonin D prevents

H2O2-induced injury in primary human umbilical vein endothelial cells

Journal of Ethnopharmacology 2010 Volume 128, Issue 2, (IF=3.014)

相关产品:

产品

总蛋白提取试剂盒 核蛋白提取试剂盒 Bradford蛋白定量试剂盒 ECL化学发光检测试剂盒 细胞蛋白提取试剂盒 组织蛋白提取试剂盒 细菌蛋白提取试剂盒 酵母蛋白提取试剂盒 磷酸化蛋白提取试剂盒 SDS-PAGE凝胶配制试剂盒

产品号 BB-3101 BB-3102 BB-3411 BB-3501 BB-3121 BB-3122 BB-3123 BB-3125 BB-3105 BB-3702

产品

磷酸化蛋白富集试剂盒 膜蛋白提取试剂盒 BCA蛋白定量试剂盒 蛋白Marker

细菌膜蛋白提取试剂盒 植物总蛋白提取试剂盒 植物膜蛋白提取试剂盒 蛋白酶抑制剂混合物 磷酸酶抑制剂混合物 SDS-PAGE上样Buffer

产品号 BB-3108 BB-3103 BB-3401 BB-3721 BB-3151 BB-3124 BB-3152 BB-3301 BB-3311 BB-3703

【核-胞浆蛋白提取方法】相关文章:

胞浆蛋白提取方法07-18

膜-胞浆蛋白提取方法07-18

蛋白提取方法07-18

组织蛋白提取方法07-18

活性蛋白提取方法07-18

核蛋白提取方法07-18

液体样本蛋白提取方法07-18

植物总蛋白提取方法07-18

植物核蛋白提取方法07-18