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关于叶绿素提取实验方法的改进
摘 要： 作者对叶绿素提取实验进行了改进。分别用洋槐、观赏碧桃、菠菜和芹菜叶片作为实验材料，用丙酮、乙醇作为提取溶剂对叶绿素进行提取并做含量测定。结果表明，四种材料中，洋槐叶片叶绿素含量最高。丙酮和乙醇对提取叶绿素含量影响差异不大，所以可以用乙醇代替丙酮提取叶绿素，既经济又无刺激性。
关键词： 叶绿体色素提取实验 实验材料 实验方法
引言
《叶绿素的提取》实验是高校生物及相关专业《植物生理学》系列实验的重要部分，是高中生物课程实验。在进行叶绿素理化性质和含量测定实验教学过程中，用丙酮作为提取溶剂，实验材料为市场购买菠菜和芹菜，但实验效果不佳。针对上述情况，笔者特对实验进行了改进尝试。实验选取洋槐、观赏碧桃、菠菜和芹菜叶作为材料，用丙酮和乙醇作为提取溶剂。
1.材料和方法
1.1材料与试剂
1.1.1材料：铜仁学院校园内新鲜洋槐叶、观赏碧桃叶，菠菜、芹菜购自市场。
1.1.2试剂：无水乙醇、丙酮，均为国产分析纯。
1.1.3仪器设备：T6新世纪紫外可见分光光度计，AL204型电子天平。
1.2实验方法
1.2.1方法：紫外分光光度计法[1]
1.2.2步骤：
叶绿素含量的测定：称取新鲜叶片0.25g于研钵中，加入5mL提取溶剂、少许石英沙和无水CaCO，研磨成匀浆，3000r/min离心10min，上清液用80%提取溶剂定容至10mL。以空白溶液对照，分别在波长645nm和663nm处测定吸光度。
2.结果与分析
2.1以丙酮作为提取溶剂时叶绿素的含量
以丙酮作为提取溶剂时，叶绿素的含量差异比较大。从图1可知，以丙酮作为提取溶剂时，洋槐叶的叶绿素a、叶绿素b和叶绿素a+b含量最高。
2.2以乙醇作为提取溶剂时叶绿素的含量
以乙醇作为提取溶剂时，叶绿素的含量差异比较大。从图2可知，以乙醇作为提取溶剂时，洋槐叶的叶绿素a含量、叶绿素b含量和叶绿素a+b含量都是最高。
2.3不同提取材料和溶剂时叶绿素的含量
以不同提取材料和溶剂提取叶绿素，其含量差异比较大。从图3可知，以丙酮和乙醇作为提取溶剂时，叶绿素a含量差异不大；以乙醇作为提取溶剂时，叶绿素b含量是洋槐叶最高；以丙酮和乙醇作为提取溶剂时，叶绿素a+b含量差异不大，且是洋槐叶含量最高。
3.结论
用丙酮作为提取溶剂时，洋槐叶的叶绿素含量最高；用乙醇作为提取溶剂时，也是洋槐叶的叶绿素含量最高；所以在选取的四种材料中，洋槐叶绿素含量最高，实验效果最好。用丙酮和乙醇提取叶绿素，其含量差异不大，所以用乙醇代替丙酮进行叶绿素含量提取实验，更加经济、无刺激性。
参考文献：
[1]张志良，瞿伟菁，李小方.植物生理学实验指导（第4版）[M].北京：高等教育出版社，2009：135-136.
基金项目：贵州省教育厅教改培育项目“基于创新能力培养的园林专业实践课程新体系的构建与实践”[黔教高发〔2012〕426]；贵州省教育厅特色实验室建设项目“梵净山特色动植物资源重点实验室”[黔教合KY（2011）232]。
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