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生物技术制药
题型与期中考试一样，名词解释五个，单选15个，填空10个。简答5个，论述题一个 期中卷子很多题目都是重点，要认真看。
第一章 绪论
论述题：：期中考试最后一题
第二章 基因工程制药
1， 将所要重组的目的基因插入载体，拼接，转入新的宿主细胞，
构建成工程菌或者细胞，实现遗传物质的重新组合，并使目的基因在工程菌内进行复制和表达的技术。
2， 基因工程药物制备的基本过程是：获得母的基因---组建重组质粒---构建基因工程菌
（或者细胞）---培养工程菌---产物的分离纯化---除菌过滤----半成品的检定—成品的检定---包装
3， 目的基因的获得三种方法：（1）反转录法（2）反转录-聚合酶链反应法（RT-PCR）
（3）化学合成法。
其中要掌握，反转录法中信使RNA的纯化原理：由于真核细胞中信使RNA3,末端常含有Poly A,，流经寡聚dT柱，被特异性的结合，再用低盐溶液洗脱下来。得纯度较高的信使RNA。RT-PCR方法中要掌握其方法步骤是：变性、退火、延伸、再重复。化学合成法中主要限制是：不能合成太长的基因，同时费用较高、
4， 基因表达的宿主可以分为真核细胞（包括酵母。丝状真菌）和原核细胞（包括大肠
杆菌，枯草芽孢杆菌，链霉菌）。
5， 重组工程菌的培养：1.分批培养（1）DO-Stat方法（2）Blanced DO-Stat方法（3）
控制菌体比生长速率方法2、补料分批培养3、连续培养4、透析培养5、固定化培养(简答题)
6， 重组蛋白质的分离纯化：主要依赖的是色谱分离方法，P50--60要掌握一下方法和
原理、优缺点！比如离子交换层析（原理是根据目的蛋白的电荷大小），亲和层析，凝胶过滤层析（原理是根据目的蛋白的相对分子量，该方法耐压，分离效率高，但是不耐高离子强度），反相色谱
第三章
7/、离体培养动物细胞的类型：（要掌握的是三个黑体的概念，考三者之一）（1）原代细胞（是指直接取自动物组织器官，经过粉碎、消化而获得的细胞悬液）、（2）二倍体细胞系（是指元代细胞经过传代，筛选、克隆，从而冲队中细胞成分的组织中挑选并纯化出某种具有一定特征的细胞株、特点：二倍体；有明显的贴壁和接触抑制特性；有限的增殖能力；无致瘤性）、（3）转化细胞系（ 通过转化形成，变成了异倍体，有无限增殖能力如：Vero。）（4）融合细胞系（掌握融合的方法：仙台病毒融合法、聚乙二醇(又曰PEG)融合法、电融合法(5)基因工程细胞系
8、常用的细胞的特性，经典的例子：Namalwa细胞，是从淋巴瘤的患者体内获取的，用于生产干扰素。Vero从非洲绿猴肾中分离，贴壁依赖的成纤维细胞，用于制备疫苗。
9．、动物细胞的培养条件：动物细胞最适合的pH值为7.2～7.4。哺乳动物细胞的最佳培养温度为：(37±5)℃、昆虫细胞：27℃。小牛血清5%---10%- (包括胎牛血清10%---20%)
10、细胞分离：常用的分离方法是酶消化法。
11、细胞计数：掌握血球计数法，为了判断细胞的死活，我们使用的染料是台盼蓝和苯胺黑。重点掌握的是：MTT染色计数法。它的原理是活细胞中的线粒体脱氢酶能将淡黄色的MTT转变成紫色的结晶沉淀，吸走的液体，把结晶放入脱色液（DMSO）有机溶剂中脱色，其色泽的深浅和活细胞的量 在590nm下比浊得到标准曲线，再根据标准
曲线求得相应比浊下的细胞数。（简答）
12、细胞冻存和复苏：慢冻速溶。
13、理想微载体的条件：（1）微载体表面性质与细胞有良好的相容性（2）无毒（3）材料是惰性的（4）比重合适（5）良好的光学透明性，最好是软体的（6）耐高温，能进行高压蒸汽灭菌（7）原料廉价剪片可反复使用。（简答）
37、包埋细胞的载体材料分三类：（1）人工合成的高分子聚合物（2）糖类（3）蛋白质
14、动物细胞的生物反应器：五种：机械搅拌生化反应器、气升式生物反应器、中空纤维管生物反应器、透析袋或者膜式反应器、固定床式生物反应器（填空或者选择题）
第四章 抗体制药
15、单克隆抗体的概念和原理： 概念：只识别一种表位(抗原决定簇)的抗体，来自单个Ｂ淋巴细胞的克隆或一个杂交瘤细胞的克隆。原理：B淋巴细胞在抗原的刺激下，能够分化、增殖形成具有针对这种抗原分泌特异性抗体的能力。B细胞的这种能力和量是有限的，不可能持续分化增殖下去，因此产生免疫球蛋白的能力也是极其微小的。将这种B细胞与非分泌型的骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞，再进一步克隆化，这种克隆化的杂交瘤细胞是既具有瘤的无限生长的能力，又具有产生特异性抗体的B淋巴细胞的能力，将这种克隆化的杂交瘤细胞进行培养或注入小鼠体内即可获得大量的高效价、单一的特异性抗体。这种技术即称为单克隆抗体技术。
细胞二者的融合方法是PEG融合方法。用HAT培养基（成分是：次黄嘌呤（hypoxantin）、氨基蝶呤（aminopterin）和胸腺嘧啶脱氧核苷（thymidin））
16、人-鼠嵌合抗体是指在基因水平上将小鼠的Ig可变区与人的Ig恒定区嵌合在一起 人改型抗体是指用鼠单克隆抗体V区的人源化 ，
小分子抗体包括：Fab与Fv抗体、单链抗体、单域抗体
17、噬菌体抗体库技术的特点：⒈模拟天然全套抗体库
⒉避开了人工免疫和杂交瘤技术
⒊可获得高亲和力的人源化抗体
18、基因工程抗体表达的方式：
⒈原核细胞表达
⒉真核细胞表达
⒊转基因植物表达
⒋转基因动物表达
19、免疫标记技术用的抗体类试剂：荧光抗体诊断试剂、免疫酶抗体诊断试剂、放射免疫用抗体诊断试剂
第五章 植物细胞制药
20.是指植物的每个细胞都包含着该物种的全部遗传信息，从而具备发育成完整植株的遗传能力。
21、外植体：用于植物组织（细胞）培养的器官或组织（的切段），植物的各部位如根、茎、叶、花、果、穗、胚珠、胚乳、花药和花粉等均可作为外植体进行组织培养, 诱发产生愈伤组织。
38、培养植物细胞过程中，生物量积累最大的是对数期，次级代谢产物最多的是稳定期
22、植物细胞与动物细胞的三大区别：叶绿体，液泡，细胞壁、
23、初级代谢产物：比如激素、次级代谢产物：比如多糖、
25、氮常以铵盐或硝酸盐形式提供
碳源分为二种：光自养培养物的是二氧化碳。异养培养物的主要是糖类。
26、两步培养法： 第一步使用适合细胞生长的培养基，营养丰富；第二步使用适于次级代谢产物合成的培养基，较低含量的硝酸盐和磷酸盐，并含有较低的糖分或少量的碳源。（第一个用于细胞生物量的累积，第二个用于次级代谢产物的生产）（简答）
27、植物细胞培养的生物反应器 1机械搅拌式生物反应器2鼓泡塔生物反应器3气升式生物反应器4转鼓式生物反应器（最优）5固定化细胞生物反应器（培养时考虑剪切力的影响，最终目的是得到次级代谢产物）
28、前提饲喂是增加次级代谢产物产率的方法，依赖于三种结构单位：1莽草酸2氨基酸3乙酸
第六章 酶工程制药
29、固定化酶：是指限制或固定于特定空间位置的酶，具体是指经物理或者化学方法处理，使酶变成不易随水流失即运动受到限制，而又能发挥酶催化作用的酶制剂。
30、酶固定化方法可以分为三种：载体结合法（包括物理吸附法、离子结合法、共价结合法）、交联法、包埋法（包括网格型和微囊型）。交联法用的交联剂试剂是戊二醛
31、固定化细胞：是指被限制或定位于特定空间位置的细胞。
32、：是指根据酶的作用原理，人工的合成具有酶性质的催化剂，必须有一个底物结合的位点和一个催化位点。
33、模拟酶中最具有典型代表性的是环糊精。
第七章 发酵工程技术
34、发酵后工业的生产水平取决于三个要素：生产军中，发酵工艺，发酵设备。
35、发酵的基本过程是：菌种—种子制备—发酵---发酵液的预处理---提取精制
36、谷氨酸生产中使用的菌种是：谷氨酸棒状杆菌。
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