50L规模中试发酵重组核苷二磷酸激酶A工程菌

50L规模中试发酵重组核苷二磷酸激酶A工程菌

中试规模发酵重组人核苷二磷酸激酶A(rhNDPK-A)工程菌,并对表达产物进行纯化.摇瓶培养一级种子至合适密度,以10%比例接种二级种子培养基,在7L发酵罐中培养至OD600为9.6～10.5,然后转入80L发酵罐中进行补料分批培养,所得菌体裂解后,经离子交换层析和亲和层析两步纯化得重组蛋白制品.结果表明,50L培养液经过10h培养后,湿菌收量为1560g/批,NDPK-A表达量为23.8%.另外,补料方式对发酵密度有明显影响.与单纯补加碳源相比,同时补加碳源和氮源可以显著提高菌体产量,但对目的蛋白表达量的提高不明显.在较优条件下,菌体产量为(2220.00±169.71)g/批,蛋白表达量为(22.00±0.42)%,纯化后重组蛋白得率为510mg/L.产物可溶、密度适中、工艺简便的中试发酵条件的建立为高得率、大规模制备重组rhNDPK-A奠定了基础.

作 者： 熊盛 钱垂文 黄立 刘秋英 张美英 王一飞 XIONG Sheng QIAN Chui-wen HUANG Li LIU Qiu-ying ZHANG Mei-ying WANG Yi-fei   作者单位： 熊盛,钱垂文,XIONG Sheng,QIAN Chui-wen(暨南大学药学院,广州,510630;暨南大学生物医药研究开发基地,广州,510630)

黄立,刘秋英,张美英,王一飞,HUANG Li,LIU Qiu-ying,ZHANG Mei-ying,WANG Yi-fei(暨南大学生物医药研究开发基地,广州,510630) 

刊 名： 中国生物工程杂志  ISTIC PKU 英文刊名： CHINA BIOTECHNOLOGY  年，卷(期)： 2006 26(10)  分类号： Q93  关键词： 核苷二磷酸激酶   中试   发酵   纯化  

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