基于PCR的siRNA表达框的制备

基于PCR的siRNA表达框的制备

目的改进目前基于PCR的方法制备siRNA表达框,转染细胞后产生高效的RNA干扰作用.方法从K562细胞中提取基因组DNA,以此为模板,PCR扩增U6启动子序列并克隆至pMD18-T载体中,用载体上的引物进行扩增,所得产物即制成作为扩增siRNA表达框的模板.选择p53为靶基因,扩增制备siRNA表达框,测序验证后,转染SH-SY5Y细胞48h后提取RNA进行RT-PCR,检测RNA干扰的效应.结果测序结果表明所克隆的U6启动子序列正确.细胞转染表达框,在mRNA水平上,p53基因的表达明显受到了抑制.结论本实验所制作的基于PCR的方法制备siRNA表达框可以很好地应用于RNAi作用研究.

作 者： 郭秋野 马文丽 张宝 吴清华 严律 郑文岭 GUO Qiu-ye MA Wen-li ZHANG Bao WU Qing-hua YAN Lü ZHENG Wen-ling   作者单位： 郭秋野,马文丽,张宝,吴清华,严律,GUO Qiu-ye,MA Wen-li,ZHANG Bao,WU Qing-hua,YAN Lü(南方医科大学基因工程研究所,广东,广州,510515)

郑文岭,ZHENG Wen-ling(华南基因中心,广东,广州,510830) 

刊 名： 南方医科大学学报  ISTIC PKU 英文刊名： JOURNAL OF SOUTHERN MEDICAL UNIVERSITY  年，卷(期)： 2006 26(4)  分类号： Q78  关键词： RNAi   siRNA   U6启动子   PCR表达框架   SH-SYSY细胞  

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