人CIDE-3基因原核表达载体的构建及蛋白的初步表达

时间:2023-04-30 05:15:57 生物医学论文 我要投稿
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人CIDE-3基因原核表达载体的构建及蛋白的初步表达

目的: 构建人CIDE-3基因的原核表达载体, 并在E.coli BL21(DE3)中表达.方法: 提取人肝母细胞瘤细胞系HepG2细胞的总RNA, 经RT-PCR扩增人CIDE-3基因片段, 并将其克隆入原核表达载体pET28a(+)中, 构建重组质粒pET28a(+)-CIDE-3.经限制性内切酶BamH I、 Xho I双酶切鉴定及序列测定后, 转化E.coli BL21(DE3), 经IPTG诱导表达组氨酸融合蛋白.结果: 获得全长为516 bp的人CIDE-3基因片段.以构建的重组质粒pET28a(+)-CIDE-3转化E.coli BL21(DE3)后, 经IPTG诱导, 表达出相对分子质量(Mr)约为23 000的重组CIDE-3蛋白.SDS-PAGE分析显示, 表达的蛋白主要以不溶性包涵体的形式存在于E.coli BL21(DE3)的胞质中, 表达量约占全菌蛋白的32%.结论: 成功地构建了原核表达载体pET28a(+)-CIDE-3, 并表达出重组CIDE-3蛋白, 为进一步多克隆抗体的制备和凋亡的相关研究奠定了实验基础.

作 者: 姚丽 李青 李蓬 张静 叶菁 陈广生 王淑芳 YAO Li LI Qing LI Peng ZHANG Jing YE Jing CHEN Guang-sheng WANG Shu-fang   作者单位: 姚丽,李青,张静,叶菁,陈广生,王淑芳,YAO Li,LI Qing,ZHANG Jing,YE Jing,CHEN Guang-sheng,WANG Shu-fang(第四军医大学西京医院病理科,陕西,西安,710032)

李蓬,LI Peng(香港科技大学生物系,香港) 

刊 名: 细胞与分子免疫学杂志  ISTIC PKU 英文刊名: CHINESE JOURNAL OF CELLULAR AND MOLECULAR IMMUNOLOGY  年,卷(期): 2006 22(2)  分类号: Q786  关键词: CIDE-3   基因克隆   原核表达  

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