人趋化因子巨噬细胞炎性蛋白3α的克隆与原核表达

人趋化因子巨噬细胞炎性蛋白3α的克隆与原核表达

目的克隆人趋化因子MIP-3 alpha基因,表达并初步纯化MIP-3 alpha融合蛋白.方法从人扁桃体中提取总RNA,再进行RT-PCR,扩增MIP-3 alpha成熟蛋白基因,并在5'和3'端分别添加NcoI和EcoRI酶切位点,通过与之对应的存在于pET32a(+)质粒上的酶切位点重组于pET32a(+)载体上,转化E.coli BL21trxB(DE3),筛选阳性克隆,酶切鉴定,DNA测序检测插入序列的正确性,缺失突变MIP-3 alpha序列前端多余碱基,获得MIP-3 alpha天然蛋白表达载体pET32a(+)/MIP-3 alpha,SDS-PAGE分析其表达,Westem Blot验证融合蛋白.大量表达并初步纯化MIP-3 alpha融合蛋白.结果成功克隆了MIP-3 alpha基因,表达并初步纯化得到MIP-3alpha融合蛋白.结论在大肠杆菌中成功构建的MIP-3 alpha硫氧还蛋白融合表达载体,以可溶性蛋白的方式表达MIP-3 alpha硫氧还蛋白.

作 者： 顾涛 罗福康 沈大斌 龚小云 郑红   作者单位： 第三军医大学西南医院综合实验研究中心,重庆400038  刊 名： 重庆医学  ISTIC PKU 英文刊名： CHONGQING MEDICINE  年，卷(期)： 2006 35(4)  分类号： Q785  关键词： MIP-3 alpha   融合表达   pET32a(+)质粒   蛋白纯化  

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