慢病毒载体介导的RNA干扰抑SUPC12细胞MyD88基因的表达

慢病毒载体介导的RNA干扰抑SUPC12细胞MyD88基因的表达

目的 研究慢病毒介导的RNA干扰对PC12细胞的转染效率和对MyD88基因的抑制效率.方法 构建针对大鼠MyD88基因3个靶点的ShRNA慢病毒载体,PC12细胞按照不同的转染条件分为正常组(DMEM完全培养液)、DMEM加入polybrene组、EN.iS(Enhance infection solution)组、EN.iS加入polybrene组.荧光显微镜下观察不同组的转染效率,采用Real-time PCR和Western blot检测不同的靶点对MyD88的不同沉默效率.结果 病毒滴度为1×108 TU/ml,MOI为100时,PC12细胞在EN.iS组的转染效率最高,转染试剂polybrene对转染效率无明显影响,沉默效率最高的靶点是5'-CATAC GCAACCAGCAGAAA-3''.结论 慢病毒介导的RNA干扰是一种高效的基因沉默手段,可以对PC12细胞中MyD88的功能进行长期的研究.

作 者： 崔万鹏 刘晓湘 方秀斌 CUI Wan-peng LIU Xiao-xiang FANG Xiu-bin   作者单位： 中国医科大学,基础医学院神经生物学教研室,辽宁,沈阳,110001  刊 名： 解剖科学进展  ISTIC 英文刊名： PROGRESS OF ANATOMICAL SCIENCES  年，卷(期)： 2010 16(2)  分类号： Q189  关键词： PC12细胞   慢病毒   RNA干扰   髓样分化因子初次应答基因88  

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