鸡新城疫病毒HeB02分离株F基因的克隆及其DNA疫苗的研究

鸡新城疫病毒HeB02分离株F基因的克隆及其DNA疫苗的研究

根据GenBank报道的鸡新城疫病毒F基因序列设计了一对引物,以鸡新城疫病毒HeB02分离株基因组为模板,通过RT-PCR扩增出了1.66kb左右的F基因片段,序列分析表明HeB02株F基因与国内标准强毒株F48 E9及弱毒疫苗La Sota和Clone30的F基因核苷酸序列的同源性分别为88.1%、84.9%和83.8%.将HeB02株F基因插入真核表达载体pVAX1中,构建了真核表达质粒pSV-F,通过脂质体转染COS-7细胞,SDS-PAGE分析可见表达的特异蛋白条带;Western blot、ELISA和中和试验检测结果表明:真核表达的蛋白与抗新城疫病毒的抗体发生特异性反应,说明F蛋白具有很好的免疫原性.采用活体电击法以真核表达质粒pSV-F免疫3周龄SPF鸡,剂量为50μg/只,3周后加强免疫1次,5周后以100倍鸡胚感染剂量(EID)的F基因同源病毒对所有鸡进行攻毒,攻毒前后每周分别以喉拭子进行病毒分离和HI效价测定.结果显示对照组在攻毒前一直没有检测到抗体效价,攻毒后检测效价为3.0 log2±1.40,并且于攻毒后第9天全部死亡;活疫苗组和实验组免疫后第2周检测到抗体效价,第5周最高,HI效价分别为8.3 1og2±1.30和7.2log2±1.23,攻毒1周后HI效价分别达9.8log2±1.55和8.9log2±1.77,极显著高于对照组(P＜0.01).免疫组未分离到新城疫病毒,对照组全部分离到新城疫病毒.表明所构建的F基因真核表达质粒可作为候选基因疫苗诱导鸡产生免疫保护反应.

作 者： 李楠 孙一敏 赵宝华 LI Nan SUN Yi-Min ZHAO Bao-Hua   作者单位： 河北师范大学生命科学学院,石家庄,050016  刊 名： 生物工程学报  ISTIC PKU 英文刊名： CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY  年，卷(期)： 2006 22(3)  分类号： Q785  关键词： 新城疫病毒   F基因   克隆和表达   DNA疫苗  

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