大肠杆菌O157:H7 sRNA基因E40缺失突变株的构建

大肠杆菌O157:H7 sRNA基因E40缺失突变株的构建

目的:利用Red系统构建肠出血性大肠杆菌O157:H7的sRNA基因E40缺失突变株.方法:选取本实验室预测并经过实验验证的sRNA基因,根据NCBI上相应的序列,设计2对引物分别扩增该sRNA基因的上下游分别长464和455 bp的同源臂,经PCR扩增,构建到相应的载体,最后以构建好的含上下游同源臂和卡那零素抗性基因的长约2500 bp的线性片段作为打靶片段,在Red重组系统的作用下与sRNA基因E40的上下游同源区域发生同组,从而把sRNA基因从基因组上置换下来,之后利用质粒pCP20将FRT位点间的卡那霉素抗性基因消除.结果与结论:构建了出血性大肠杆菌O157:H7的sRNA基因E40的缺失突变株,为进一步研究sRNA基因在出血性大肠杆菌O157:H7生长及致病过程中所起的功能奠定了良好的基础.

作 者： 王刚 宋兰 马延 周围 张德礼 岳俊杰 梁龙 WANG Gang SONG Lan MA Yon ZHOU Wei ZHANG De-Li YUE Jun-Jie LIANG Long   作者单位： 王刚,WANG Gang(军事医学科学院,生物工程研究所,北京,100071;西北农林科技大学,动物医学院,陕西,杨凌,712100)

宋兰,马延,周围,岳俊杰,梁龙,SONG Lan,MA Yon,ZHOU Wei,YUE Jun-Jie,LIANG Long(军事医学科学院,生物工程研究所,北京,100071)

张德礼,ZHANG De-Li(西北农林科技大学,动物医学院,陕西,杨凌,712100) 

刊 名： 生物技术通讯  ISTIC 英文刊名： LETTERS IN BIOTECHNOLOGY  年，卷(期)： 2010 21(2)  分类号： Q78  关键词： 肠出血性大肠杆菌O157   H7   sRNA   Red重组系统  

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