利用碱性磷酸酶融合表达技术研究神经导向因子netrin-4的功能

利用碱性磷酸酶融合表达技术研究神经导向因子netrin-4的功能

目的:采用碱性磷酸酶(AP4)标记技术研究netrin-4的神经导向功能和受体结合特征,并评估碱性磷酸酶作为标签分子在真核基因功能研究中的意义.方法:将netrin-4全长及3个结构域编码区cDNA克隆到碱性磷酸酶表达载体APtag4,成功构建真核表达载体AP4-netrin4、AP4-LNT、AP4-EGFL和AP4-NCT,进而在COS7细胞中表达出含有AP标签的融合蛋白,并通过神经组织块培养技术和神经元原代培养技术对其活性进行鉴定.结果:确认了netrin-4的神经突起导向功能.进一步通过对AP标签进行检测,发现netrin-4全长、LNT和NCT可与原代培养的神经元表面相结合,而EGFL不结合,说明神经元表面含有netrin-4受体或结合位点,且可能通过LNT和NCT结构域起作用.结论:netrin-4具有明确的神经突起导向功能,在神经元表面含有结合位点,同时发现碱性磷酸酶标签融合表达技术在真核基因功能研究方面具有一定优势.

作 者： 秦树桐 高艳 王利红 周仁平 张成岗 QIN Shu-Tong GAO Yan WANG Li-Hong ZHOU Ren-Ping ZHANG Cheng-Gang   作者单位： 秦树桐,高艳,王利红,张成岗,QIN Shu-Tong,GAO Yan,WANG Li-Hong,ZHANG Cheng-Gang(军事医学科学院放射与辐射医学研究所,北京,100850)

周仁平,ZHOU Ren-Ping(Department of Chemical Biology,College of Pharmacy,Rutgers University,Piscataway,NJ 08854,USA) 

刊 名： 军事医学科学院院刊  ISTIC PKU 英文刊名： BULLETIN OF THE ACADEMY OF MILITARY MEDICAL SCIENCES  年，卷(期)： 2006 30(3)  分类号： Q78  关键词： 神经导向因子   netrin-4   碱性磷酸酶   融合表达   基因   神经元  

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