含2A片段的重组黄热病毒17D疫苗表达载体的构建

含2A片段的重组黄热病毒17D疫苗表达载体的构建

黄热疫苗是一种减毒的黄热病毒17D(YF-17D)活疫苗,是现有疫苗中最安全、最有效的疫苗之一,适于发展为疫苗载体.用RT-PCR法扩增出覆盖YF-17D全长基因组的3个cDNA片段:5'cDNA(A)、3'cDNA(B)和中间cDNA(C),同时引入SP6增强子序列、酶切位点和重复序列.顺序将A和B同E.coli-yeast穿梭质粒pRS424连接,再与C共转染酵母菌,利用缺少色氨酸和尿嘧啶的选择性固体培养基筛选出含YF-17D全长基因组的cDNA质粒.以该质粒为模板,经过DNA重组和酵母同源重组,获得含有口蹄疫病毒蛋白水解酶2A片段的重组YF-17D表达载体.将该表达载体体外转录后,电击转染BHK-21细胞.间接免疫荧光检测结果表明,RNA转录体在BHK-21细胞中进行了稳定的表达;滴度测定与形态学观察结果表明,重组病毒在细胞中的生长曲线等特征同母本YF-17D十分相似.结果提示,利用酵母菌同源重组在2A部位引入异种抗原基因,重组YF-17D表达载体pRS-YF-2A1具有成为高效活疫苗表达载体的潜力.

作 者： Xiaowu Pang 付文川 郭银汉 张立树 谢天培 Xinbin Gu Xiaowu Pang FU Wen-Chuan GUO Yin-Han ZHANG Li-Shu XIE Tian-Pei Xinbin Gu   作者单位： Xiaowu Pang,郭银汉,张立树,谢天培,Xiaowu Pang,GUO Yin-Han,ZHANG Li-Shu,XIE Tian-Pei(北京东方天甲科技发展有限公司,北京,100078)

付文川,FU Wen-Chuan(天甲丽珠生物科技有限公司,香港)

Xinbin Gu,Xinbin Gu(霍华德大学医学院,华盛顿,20059,美国) 

刊 名： 生物工程学报  ISTIC PKU 英文刊名： CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY  年，卷(期)： 2006 22(3)  分类号： Q785  关键词： 黄热病毒17D   表达载体   2A片段   全长cDNA   同源重组  

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