VEGF165和VEGF121在MC3T3-E1细胞中的表达及生物学功能

VEGF165和VEGF121在MC3T3-E1细胞中的表达及生物学功能

目的:构建一个能在MC3T3-E1细胞中稳定表达,并具有生物学活性的VEGF165和VEGF121基因表达载体.方法:采用RT-PCR技术从HL-60细胞中扩增人VEGF165和VEGF121基因,将获得的基因定向插入pcDNA3.1(+)真核表达质粒中,测序正确后用脂质体将表达质粒转染入MC3T3-E1细胞.细胞经G418加压有限稀释筛选,采用ELISA法、Western blot法及免疫荧光法检测VEGF蛋白表达,并用MTT法检测表达的蛋白对血管内皮细胞株(HUECV304)的增殖活性影响.结果:通过基因测序表明获得的VEGF165和VEGF121与GeneBank登录的序列一致,构建的质粒分别为VEGF165/pcDNA3.1(+)质粒和VEGF121/pcDNA3.1(+)质粒,ELISA及Western blot检测结果均表明VEGF165和VEGF121基因转染MC3T3-E1后能在细胞中稳定表达,表达产物能明显促进HUECV304细胞生长.结论:基因转染的MC3T3-E1细胞能稳定、高效表达具有生物学活性的VEGF165和VEGF121重组蛋白.

作 者： 贺俊 王慧明 姚航平 HE Jun WANG Hui-ming YAO Hang-ping   作者单位： 浙江大学医学院,附属第一医院,浙江,杭州,310003  刊 名： 浙江大学学报（医学版）  ISTIC PKU 英文刊名： JOURNAL OF ZHEJIANG UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCES)  年，卷(期)： 2006 35(3)  分类号： Q813  关键词： 血管内皮生长因子类/代谢   血管内皮生长因子类/遗传   3T3细胞   基因表达   转染   质粒  

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