科学研究的设计和方法中的科学性
[关键词] 科学研究 设计 方法
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成军, 中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心、 全军病毒性肝炎防治研究重点实验室 北京市 100039摘要 生物学和医学的研究发展很快，不断有新的理论和技术出现，推动着生物学和医学领域的不断发展. 现代分子生物学技术和理论为肝脏病学的研究提供了前所未有的机遇. 由于发展不平衡，对于新理论和新技术的接受程度和推广还有一段艰难的过程. 在这一过程中，不可避免地存在一些认识上的误差和偏差. 因此本文选取3个有代表性的例子，阐明科学研究的设计和方法中的科学性.0 引言 我作为几家杂志的编委，经常会审阅来自不同单位的稿件，在审阅过程中发现了一些问题. 本文的目的是提出一些问题，供编者、读者作为参考，共同提高我们科研设计的水平和学术论文的质量. 关于正确理解现代分子生物学理论和技术在生物医学研究领域中的应用，有许多鲜明的例子，本文主要选取3个有代表性的例子，说明在科研设计和学术论文鉴赏过程中常见的误区.1 研究基因转录水平主要考虑的是启动子的转录活性 在审稿过程中，我接到一篇研究核苷类似物拉米夫定(lamivudine)抑制乙型肝炎病毒(HBV)X基因的研究报道. 基本的研究方法和过程如下: 首先利用分子生物学技术，构建HBV X基因的真核表达载体，如具有巨细胞病毒(CMV)早期即刻基因启动子的pcDNA3，然后用这一载体转染肝母细胞瘤细胞系HepG2，建立稳定转染细胞系，在细胞系的培养上清中加入拉米夫定，利用半定量的逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)技术，检测HBV X基因的转录物水平，并进行半定量分析，结果证明HBV X基因的转录物水平有显著降低，结论是拉米夫定对于HBV X基因的转录具有显著的抑制作用. 这一篇文章的设计存在严重的问题，对于分子生物学的基本原理的理解有偏差，是不能发表的. 首先我们必须明白，基因的转录调节是在基因启动子指导下进行的，基因转录水平的高低受到许多因素的影响，但是主要决定于启动子在这一系统中的转录活性，而与启动子指导的目的基因的性质没有太多的关系[1-12]. 这样的设计更多的是研究了拉米夫定对于CMV早期即刻基因启动子转录活性的抑制作用，而与HBV X基因的转录没有关系. 如果本实验的目的基因换成别的什么基因，所得到的结果也同样不能说明目的基因的变化. 例如这一实验中我们将HBV X基因换成报告基因氯霉素乙酰转移酶(CAT)，那么岂不是可以得出结论拉米夫定可以抑制氯霉素乙酰转移酶的表达了吗？显然这是不合适的. 关于转录水平的研究，正确的研究方法设计应该是特定基因的启动子序列与报告基因构件成报告基因表达载体，转染合适细胞系，共同转染其他的表达质粒，或者在细胞培养上清中加入某些药物(如拉米夫定)，以研究基因表达或药物对于该基因转录表达的影响[13-15]. 要研究什么基因的转录表达，即选择该基因的启动子基因序列，而不是选择其编码基因序列. 目前报告基因表达载体的构建与细胞转染模型的建立是研究基因表达调控非常常用和成熟的研究技术和策略，常用的报告基因包括CAT、b-半乳糖苷
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